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用途：CRM-ATX是一種校準(zhǔn)溶液認(rèn)證的參考物質(zhì)（CRM），設(shè)計(jì)用于A(yíng)TX-a的分析方法開(kāi)發(fā)和準(zhǔn)確定量。CRM濃度使其適用于制備稀釋系列，用于儀器校準(zhǔn)，如通過(guò)紫外吸收（LC-UV）、熒光（LC-FL）或質(zhì)譜（LC-MS）檢測(cè)的液相色譜法，以及用于加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)的對(duì)照樣品。

制備：ATX-a是從Aphanizomenon issatschenkoi的藻類(lèi)培養(yǎng)物中分離出來(lái)的[3]。從細(xì)胞中提取毒素，通過(guò)色譜純化，然后真空干燥成無(wú)水形式[4，5]。CRM溶液通過(guò)將純化的ATX-a溶解在用0.01%乙酸脫氣的甲醇/水（9:91，v/v）中來(lái)制備。在氬氣下，用涂有聚四氟乙烯的攪拌棒和磁力攪拌器將溶液充分混合。將等分試樣分配到預(yù)先填充氬氣的琥珀色玻璃安瓿中，然后立即對(duì)其進(jìn)行火焰密封。每個(gè)安瓿含有大約0.5毫升溶液。

結(jié)構(gòu)確認(rèn)和純度評(píng)估：

通過(guò)以下技術(shù)檢查毒素的純度：500 MHz 1H NMR光譜、LC-MS[6]、LC-UV、毛細(xì)管電泳紫外檢測(cè)（CE-UV）[7]和液相色譜化學(xué)發(fā)光氮檢測(cè)（LC-CLND）[8]。通過(guò)核磁共振波譜[9]和四極飛行時(shí)間（QToF）質(zhì)譜法證實(shí)了ATX-a的分子結(jié)構(gòu)。ATX-a的1H NMR光譜如圖1所示。在166.12269 Da處獲得了[M+H]+離子的準(zhǔn)確質(zhì)量，其在166.12264 Da的理論單同位素質(zhì)量的0.05 mDa（Δ=

0.30ppm）。還獲得了[M+H]+離子的串聯(lián)質(zhì)譜，如圖2所示。使用NMR、LC-MS、LC-UV和LC-CLND來(lái)估計(jì)ATX-a的純度。沒(méi)有觀(guān)察到主要雜質(zhì)。

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